NC膜和PVDF膜怎么选

硝酸纤维素膜（NC膜）是蛋白印迹实验的标准固相支持物。在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与硝酸纤维素膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起，虽然这其中的机制还不是十分清楚，但由于硝酸纤维素膜（NC膜）的这个特性，而且易于封闭非特异性结合，从而得到了广泛的应用。

在非离子型的去污剂作用下，结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小，要选择不同孔径的硝酸纤维素膜（NC膜）。因为随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。但是膜孔径如果小于0.1mm，蛋白的转移就很难进行了。

从膜的质地上来看，最重要的指标就是单位面积上能够结合的蛋白的量。硝酸纤维素膜（NC膜）的结合能力主要与膜的硝酸纤维素的纯度有关，市场上有些硝酸纤维素膜（NC膜）通常会还有大量的醋酸纤维素，因而降低了蛋白的结合量。如果采用的是100%纯度的硝酸纤维素， 保证了最大的蛋白结合量，可达80-150μg/cm2。由于100%的纯度，因而也大大减少了非特异性的结合，降低杂交背景，无需高严谨度的洗脱步骤。其次，膜的强度和韧性也是需要考虑的因素。常规的硝酸纤维素膜比较脆，漂洗一两次就会破损，不能反复使用。

回收PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF本质是一种疏水性的聚合物，在水溶液中不会浸湿，为了在水性缓冲液和系统中使用PVDF膜，首先必须将其浸泡在50%（v/v）或更高浓度的醇溶液中。（PVDF膜在使用时需预处理，用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。）甲醇、乙醇和异丙醇都适合浸泡这种膜。随着膜的外观从不透明到半透明，完全浸湿是显而易见的。之后必须用水反复冲洗以去除醇类，经预处理的膜可以直接放入转印缓冲液中平衡。

一旦膜被浸湿，蛋白结合可通过蛋白与膜的接触而实现。由于蛋白与膜的结合贯穿整个膜的厚度（深度），结合能力是由孔的内部表面积来决定的，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。0.2um PVDF膜内部表面积大约是0.45um PVDF 膜的三倍，使其吸附能力更高。PVDF膜是疏水性的，一般大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜，小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜。